死细胞去除试剂盒

MagLive Dead Cell Removal Kit

保存：室温。（开封后可以 2-8°C 保存） 规格：10 Tests / 25 Tests

简介：

MagLive 死细胞去除试剂盒通过负选择的磁性分离方法去除细胞培养过程中的死细胞和细胞碎片。MagLive 可以去除死细胞、细胞碎片、游离的寡核苷酸。通过这样的步骤后可以提高细胞培养的纯度，改善数据分析的质量，并对后续下游的实验结果产生积极的影响，对将来的分子生物学的细胞分析更为有效。MagLive 产品不含外源蛋白，如 Annexin-V（膜联蛋白 V）。

MagLive 特点：

² 不含 Annexin-V

² 不含外源蛋白，不会污染

² 无菌溶液

² 一步去除死细胞、细胞碎片、游离寡核苷酸

² 不需要含钙（Annexin-V 需要）的缓冲液

² 对于悬浮细胞尤其适用

² 和台盼蓝或 PI 死细胞检测方法兼容

提供的实验材料：

MagLive 死细胞去除溶液：10T (1 mL) / 25T (2.5 mL)

其他未提供的所需实验材料：

1. 5ml 无菌培养管/试管

2. 15ml 无菌离心管

3. 离心机

4. 磁性分离器（磁力应足够大，否则纳米级磁珠不容易被分离）

5. 移液器及吸头

6. 无菌 PBS

7. 台盼蓝/细胞计数器等细胞计数相关耗材

实验步骤：

1. 收集不超过 5mL 的浓度为 1×10⁵～1×10⁶/mL 的悬浮细胞溶液至 5mL 的无菌聚苯乙烯培养管

/试管中并计数。

2. 对细胞悬浮液 300g 离心 5min。去除上清液，用 1mL 无菌 PBS 重悬。

注意：不同于 Annexin V 的细胞分离方法，本产品不需含 Ca²⁺缓冲液。

但我们建议对细胞悬液进行血清饥饿处理，因为血清会影响分离效果。而且培养基中游离的蛋白也会影响分离效果，因为游离的蛋白和死细胞会竞争与磁珠的结合。我们建议采用无蛋白培养基。

3. 对重悬后的溶液加入 0.1mL MagLive。使用移液器吸头进行轻柔吹吸两次，以使溶液完全混匀。室温孵育 5min。

注意：磁性分离的时间不能太长，否则活细胞会沉降，反而降低活细胞率。

4. 将试管放置在磁性分离器环境中 15min。本溶液中的死细胞、细胞碎片、游离的寡核苷酸等会被磁珠捕获并吸附至磁铁一侧。应使试管和磁铁的距离越小越好。

说明：如果实验室没有磁性分离器，可使用更经济的磁铁代替。但其磁力应足够分离纳米级磁珠。可以先采用常见细胞预实验，如 NIH3T3。

5. 保持试管不动。另取 1 支 15mL 无菌离心管。使用移液器吸头轻柔的吸取细胞悬液（约 1mL） 转移至新的 15mL 离心管中。注意不要吸取到磁珠层（参考注意事项 4）。

6. 吸取 9mL 无菌 PBS 缓冲液至 15mL 离心管。轻柔混匀，300g 离心 5min。去除上清液。

7. 使用细胞培养液将离心后的细胞进行重悬。即可以进行后续的实验了。

以上实验数据为经验数据，亦可自行优化。以上过程应保持在无菌条件下进行。

常见问题：

1. 细胞非悬浮状态而是成团状态，是否可以使用 MagLive 死细胞去除试剂盒？

答：可以。需要先对成团细胞进行消化解离。推荐使用 Mildase 细胞消化液产品（订购货号：

HC0145）或 FCMase 细胞消化液（订购货号：HC0146）。

2. 对需要去除的悬浮溶液中细胞的浓度是否有要求？

答：有要求。如果细胞浓度过高会影响并降低死细胞的去除效率。因此，我们推荐细胞的浓度为 1×10⁵～1×10⁶/mL，最高不要超过 1×10⁷/mL。

3. 磁性分离后溶液的颜色依然是棕色的而非无色透明是什么原因？

答：本试剂的原理是磁珠分离，但未结合目标死细胞的磁珠是不容易被磁吸的，所以一定时间内溶液颜色并不会完全无色。未吸附的磁珠后续会被清洗掉（实验步骤 6）。