百萤-Cy3 炔烃系列产品实验方案详情-分析方法-资讯-生物在线

百萤-Cy3 炔烃系列产品实验方案详情

作者:西安百萤生物科技有限公司 2023-07-05T00:00 (访问量:11050)

Cy3 炔烃是美国AAT Bioquest生产的荧光染料,各种花青3(Cy3)染料已用于标记生物分子,用于荧光成像和其他基于荧光的生化分析。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Cy3 炔烃。 

实验方案

操作方案

标记寡核苷酸

1.准备以下试剂:

200mMTHPTA [tris(3-羟丙基三唑基甲基)胺]水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃修饰的低聚水溶液(尽可能浓缩,例如>10 mg / mL)

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液(有关推荐的溶剂,请参阅我们的网站)

2.在反应前将CuSO4与THPTA以1:2的比例混合并充分涡旋几分钟。该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃改性的低聚物溶液中加入过量的染料叠氮化物(摩尔比为2-5当量)。

4.加入5当量的THPTA / CuSO4工作溶液(来自步骤1)。

5.加入10-30当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌,涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.沉淀或纯化寡聚物。

标记肽

1.准备以下试剂:

200 mM THPTA配体水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃修饰肽水溶液或DMF溶液(取决于您的肽溶解度,如果可能,> 10 mg / mL)

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液(有关推荐的溶剂,请参阅我们的网站)

2.在反应前几分钟以1:2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃修饰的肽溶液中加入过量的染料叠氮化物(摩尔比为5-10当量)。

4.加入5-10当量的THPTA / CuSO4。

5.加入10-20当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌,涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.通过HPLC纯化您想要的肽。

标记炔烃有机小分子

1.准备以下试剂:

200 mM THPTA配体水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃化合物水溶液或DMF溶液(取决于您的化合物溶解度,如果可能,> 10mg / mL,)

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液(有关推荐的溶剂,请参阅我们的网站)。

2.在反应前几分钟以1:2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。当冷冻时,该溶液可稳定数周。

3.向炔烃溶液中加入过量的染料叠氮化物(摩尔比为5-10当量)。

4.加入25当量的THPTA / CuSO4。

5.加入50当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌反应混合物30-60分钟。

7.通过色谱或其他方法纯化您想要的分子。

标记生物聚合物

1.准备以下试剂:

200 mM THPTA配体水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃改性的水中生物聚合物(尽可能浓缩,例如> 5毫克/毫升)

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液(有关推荐的溶剂,请参阅我们的网站)。

2.在反应前几分钟以1:2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃改性的生物聚合物溶液中加入过量的染料叠氮化物(负载比:5-20染料叠氮化物/炔烃)。

4.加入5摩尔当量(参考染料叠氮化物)的THPTA / CuSO4。

5.加入10当量的抗坏血酸钠(参见染料叠氮化物)。

6.在室温下搅拌,涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.通过凝胶过滤或透析纯化您想要的分子。

标记细胞,细胞裂解物或生物样品

1.准备以下试剂:

100mM THPTA配体水溶液

20mM CuSO4水溶液

300mM抗坏血酸钠水溶液

2.5mM炔烃或叠氮化物标记试剂水溶液或DMSO溶液

2.对于每个叠氮化物或炔烃修饰的细胞或细胞裂解物样品,将以下试剂加入1.5 mL微量离心管中,然后短暂涡旋混合。

50μL细胞或细胞裂解液样品

50μLPBS缓冲液

50μL5mM相应的染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液(或染料炔烃)检测试剂

3.加入10μL100mM THPTA溶液,短暂涡旋混合。

4.加入10μL20mM CuSO4溶液,短暂涡旋振荡。

5.加入10μL300mM抗坏血酸钠溶液以引发点击反应,短暂涡旋混合。

6.保护点击反应不受光照,使其在室温下孵育30分钟。

7.点击标记细胞或细胞裂解物并准备用于下游处理和分析。

 


1所示。化学结构青蓝3(相当于Cy3®]

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