超全RNase抑制剂——预防RNase污染的关键原料!-技术前沿-资讯-生物在线

超全RNase抑制剂——预防RNase污染的关键原料!

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2024-10-16T00:00 (访问量:23176)

 

01无处不在的RNase污染

RNase(Ribonuclease,核糖核酸酶)是一类能够催化RNA降解为小分子RNA的核酸内切酶,主要切断核苷酸之间的磷酸二酯键,是生物的一种防御机制,相比于外源性的DNA,外源性的RNA侵入细胞后会参与转录和翻译,往往更加危险。所以几乎所有的生物都进化出了RNase,用来防御外源性RNA的入侵。因此,RNase广泛存在于真核、原核生物的所有细胞和组织中,除此之外,环境和许多生物材料都带有RNase,像实验用水与缓冲液、枪头与离心管、酶及其他相关试剂和耗材等;实验大环境的污染,如空气、灰尘和大多数物体的表面;实验人员的毛发、皮肤碎屑、汗液和唾液等。

 

RNase分子非常稳定,结构中存在二硫键,其活性不需要二价阳离子存在,因此RNase不容易变性,即使高温或使用变性剂后也容易发生复性。

 

RNase的无处不在,并且稳定性极强,耐热、耐酸、耐碱,使得RNA相关研究过程中,RNA样本中微量的RNase污染也足以让其完全降解,导致实验失败或影响RNA分析的结果。

 

 

02RNase抑制剂有效防止RNase污染

RNase分为内源性和外源性,其中内源性RNase在细胞破裂时可同时释放出来,因此消除内源性RNase的作用是RNA提取过程中非常关键的一个步骤。外源性RNase分布则非常广泛,空气、人的皮肤、头发和唾液、实验用水、耗材、原料酶等试剂中都存在RNase,是造成RNA容易降解的重要原因。因此,从源头上避免RNase污染十分必要,一方面要严格控制外源性RNase的污染,另一方面要最大限度地抑制内源性的RNase。

 

常见的RNase抑制剂有焦碳酸二乙酯(DEPC)、异硫氰酸胍、氧钒核糖核苷复合物(RVC)和RNase的蛋白质抑制剂(RNasin)。其中,DEPC和异硫氰酸胍具有一定的毒性,RVC对PCR聚合酶有抑制作用,不利于展开后续的实验。RNase的蛋白质抑制剂能够特异地与RNase以非共价键结合形成复合体,造成RNase失活,因不具有毒性,不影响后续PCR实验等优势,常被用来减少RNase的污染。目前,RNasin主要用于cDNA合成,体外转录,体外翻译,以及mRNA-protein复合物分离纯化等过程中保护RNA不被降解,还可用于特定RNase活性的鉴定等。

 

 

03翌圣生物预防RNase污染的解决方案

翌圣生物以可溶形式在大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源/猪源RNase抑制剂,能够广泛抑制各种类型RNase(RNase A, B, C),并且该抑制剂不会抑制聚合酶的活性,如:TaqDNA聚合酶、AMV或M-MuLV反转录酶或噬菌体RNA聚合酶(SP6、T7或T3),已验证可广泛应用于RT-PCR/qPCR、RNA-seq、cDNA克隆和文库构建等多个应用场景。

 

此外,除了常规RNase抑制剂,翌圣生物还开发了经过UCF.ME®超低残留工艺处理,宿主残留更低,适合对背景菌要求更为严格的应用场景的RNase抑制剂,助力解决病原检测中的背景菌干扰,提高检测准确度。

 

 

04产品性能01

无核酸外切酶、切口酶及RNase残留

 

注:N代表阴性对照;1、2、3为3组平行实验。

 

02

E.coli基因组DNA残留< 0.1 copies/100 U,显著低于常规版本

对不同批次的UCF.ME® Murine RNase Inhibitor进行宿主(E.coli)基因组DNA残留检测,并与常规Murine RNase inhibitor的宿主残留水平对比,结果显示UCF.ME® Murine RNase Inhibitor宿主基因组DNA残留低于0.1 copies/100 U,显著低于常规版本。

 

03

8U/T投入量能有效抑制70ng RNase A

以Total RNA为模板,配制RT-qPCR反应体系,验证UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (Cat#14672ES)消化RNaseA能力,结果表明UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (Cat#14672ES)能有效抑制RNase A,且相较市面上同类产品抑制能力更有优势。

 

04

兼容NGS应用体系:建库产量及宿主DNA残留优于进口品牌

UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)搭配翌圣全能型逆转录酶Hifair® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL) (Cat#14604ES)应用于RNA建库,建库产量高于进口品牌,测序数据质量相当且宿主DNA残留更低。

 

 

05产品选择

产品定位

产品名称

产品货号

鼠源RNase抑制剂

Murine RNase inhibitor (40 U/μL)

10603ES

Murine RNase Inhibitor (200 U/µL)

10610ES

Murine RNase Inhibitor (300 U/µL)

14671ES

低残留鼠源RNase抑制剂

UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (40 U/μL)

14672ES

UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (200 U/μL)

14673ES

UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (300 U/μL)

14674ES

低残留猪源RNase抑制剂

UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (40 U/μL)

14675ES

无甘油版RNase抑制剂

Murine RNase Inhibitor(40 U/µL,Glycerol-free)

10701ES

Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)

10703ES

 

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