上海交通大学医学院附属瑞金医院的研究团队通过检测尿液蛋白质组（吉凯助力），发现了成人斯蒂尔病的新型生物标志物，并进一步分析了这些蛋白标志物与AOSD临床表现的相关性。文章以“Urinary Proteomics Identifying Novel Biomarkers for the Diagnosis of Adult-Onset Still’s Disease” 为标题，发表在Frontiers in Immunology （影响因子：7.561）上。本研究为成人斯蒂尔病的无创诊断提供了新的机会。
1. 前期小样本探索
AOSD组（实验组）：3个（15个患者，每5个患者的尿液混为1个样本）
HC组(健康对照组)：3个（15个健康个体，每5个健康个体的尿液混为1个样本）
特别提示：对于这种发病原因不明的全身性疾病，体液样本（如血清、血浆、尿液等）是良好的研究用样本。
2. ELISA验证及生物标志物有效性分析
（1）验证蛋白：LRG1、ORM1、ORM2（在尿液蛋白质组结果中前三上调的蛋白）
（2）验证队列仍采用尿液，分组信息：
AOSD组：70个患者
HC组：50个健康人
其他组：24个类风湿性关节炎（RA）患者、27个肿瘤(neoplasm)患者和14个有感染的(infection)患者。
3. 分析上调前三的尿液蛋白与疾病的相关性
（1）尿液蛋白LRG1、ORM1、ORM2和病理参数的相关性
（2）尿液蛋白LRG1、ORM1、ORM2和临床表现的相关性
（3）尿液蛋白LRG1、ORM1、ORM2和血清细胞因子的相关性
研究结果
1. 尿液蛋白质组学揭示了能区分AOSD患者和HC组的特征蛋白
AOSD组和健康对照组（HC）的尿液蛋白质组比较共分析得到92个差异蛋白（fc>2,p<0.05），其中上调蛋白71个，下调蛋白21个。这些差异蛋白又分为59个功能性蛋白和33个未知功能蛋白。59个功能蛋白富集在固有免疫系统和中性粒细胞脱颗粒通路，此外还富集在血小板脱颗粒通路。GO分析发现差异蛋白中有26个蛋白是分泌蛋白。此外，蛋白-蛋白相互作用分析显示上调前三的蛋白LRG1、ORM1和ORM2有强相互作用关系。
2. ELISA验证及生物标志物有效性分析
对尿液蛋白质组上调前三的蛋白LRG1、ORM1、ORM2在更大规模的尿液样本中进行ELISA验证。结果显示，AOSD患者尿液LRG1水平高于风湿性关节炎患者、肿瘤和健康个体。AOSD患者尿液ORM1和ORM2蛋白水平明显高于风湿性关节炎患者、肿瘤、感染和健康个体。此外，作者分析了这几个蛋白作为疾病诊断标志物的有效性。LRG1、ORM1和ORM2的AUC分别为0.700、0.837和0.736，三个蛋白构成的标志物组合的AUC为0.838。这三种尿液蛋白，特别是ORM1，可作为AOSD的诊断标志物。
3. 上调前三的蛋白与疾病的相关性
（1）尿液蛋白LRG1、ORM1、ORM2和病理参数的相关性
结果表明，LRG1、ORM1和ORM2的水平与疾病的系统性评分呈正相关。此外，LRG1、ORM1和ORM2的水平与红细胞沉降率（ESR）相关。LRG1与天冬氨酸转氨酶水平以及ORM2与丙氨酸转氨酶水平均呈正相关。
（2）尿液蛋白LRG1、ORM1、ORM2和临床表现的相关性
结果表明，淋巴结病、肺炎、胸膜炎患者的尿液LRG1水平升高，心包炎和肺炎患者的尿液ORM1水平升高。
（3）尿液蛋白LRG1、ORM1、ORM2和血清细胞因子的相关性
细胞因子风暴是AOSD的标志，因此作者分析了AOSD患者尿液LRG1、ORM1、ORM2水平和血清细胞因子（包括IL-1β，IL-6、IL-18和TNF-α）之间的相关性。结果表明，尿液LRG1水平与IL-1β、IL-6和IL-18呈正相关；尿液中ORM1水平与IL-1β水平呈正相关。该结果意味着，AOSD患者尿液中的LRG1和ORM1水平与AOSD的炎症条件相关。
研究总结
本研究通过比较成人斯蒂尔病患者（AOSD）和健康对照个体的尿液蛋白质组学发现，异常表达蛋白主要富集在固有免疫系统和中性粒细胞脱颗粒途径。蛋白组学分析表明LRG1、ORM和ORM2蛋白在AOSD患者尿液中高表达，并进一步通过ELISA在大样本规模中得到验证。生物标志物分析表明，ORM1的生物标志物潜质更高。此外，作者发现尿液中LRG1、ORM1和ORM2水平与疾病系统性评分及红细胞沉降率呈正相关；尿液中LRG1水平与IL-1β、IL-6和IL-18水平呈正相关，而尿液中ORM1水平月IL-1β呈正相关。总体，作者的研究确定了新的无创和简单的用于筛查成人斯蒂尔病的尿液标志物。
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