1. 试剂盒组成 

Megazyme亚硫酸盐检测试剂盒可进行50次测定实验。检出限为0.34 mg / L。每次测定在1至50 µg亚硫酸盐范围内呈线性分析。并提供有完整的试验方法：

组成 

内容物 

储存条件 

瓶 1

缓冲液 28 mL 加上叠氮化钠(0.02% w/v)作为防腐剂 

4℃保存，稳定性>2年

瓶 2

NADH，冷冻干粉

在-10°C 以下稳定 2 年 

瓶 3

NADH 过氧化物酶悬浮液(1.1 mL)  

4℃保存，稳定性>2 年

瓶 4

亚硫酸盐氧化酶混悬液(1.1 mL)

4℃保存，稳定性>2 年

瓶 5

硫酸钠标准粉末(5g)

常温保存，稳定性>5 年

2.试剂溶液/悬浮液制备 

1. 瓶1和瓶4的试剂可直接使用，4℃保存，稳定性>2年。

2. 将第2瓶的液体溶解在11mL蒸馏水中。在4°C下稳定> 1年，或在-10°C以下稳定> 2年(为了避免重复的冻融循环，将其

分成适当大小的块并储存在聚丙烯管中)。

3&4 瓶3和瓶4的试剂可直接使用。在第一次开瓶之前，摇动瓶子以去除可能附着在橡胶塞子上的任何酶。随后，将瓶子直立放

置。在使用前旋转瓶子使其混合。在4℃下稳定> 2年。

5.      称1g柠檬酸到1L的容量瓶中，用蒸馏水溶解至1L。准确加入590 mg的亚硫酸钠，溶解后直接使用。这种亚硫酸盐溶液相当于300毫克/升的二氧化硫。溶液中的亚硫酸盐不稳定，每小时会失去约2%的亚硫酸盐含量，因此该溶液须在使用当日配制。 

注意:  

1. 仅在对所使用的分光光度计的准确性存在疑问或怀疑样品中的物质引起抑制的情况下才能测定亚硫酸盐标准溶液。 亚硫酸盐的浓度直接由NADH的消光系数确定。

2. 仅使用新鲜蒸馏水进行测定。或者，在搅拌下用1g活性炭处理100 mL脱矿质水5分钟，然后过滤。

3.仪器和装置 (推荐)

1) 容量瓶（1L）

2) 一次性塑料或玻璃比色皿（光路1厘米，3mL）

3) 微型移液器，例如 GilsonPipetman®（20 µL，200 µL和1 mL）

4) 多通道移液器，例如 EppendorfMultipette®

含25 mLCombitip®（可分配0.5 mL等分的缓冲液1和0.2 mL NADH溶液等分试样）

5) 时钟

6) 分光光度计设置为340nm

7) 涡旋混合器（例如IKA®Yellowline Test Tube Shaker TTS2）。

8) 恒温水浴

4．检测方法 

波长: 340 nm

比色杯: 1 cm 光路 (玻璃或者塑料) 温度: ~ 25°C

最终体积: 3.34 mL

样品溶液: 每个比色皿1.0-50 µg亚硫酸盐（在0.10-2.00 mL样品体积中）

空白调 0：相对于空气或者水

移液至3mL比色管 

空白管 

样品管 

蒸馏水25℃

2.60 mL

2.50 mL

样品溶液

-

0.10 mL

溶液 1 (缓冲液)

0.50 mL

0.50 mL

溶液 2 (NADH)

0.20 mL

0.20 mL

悬浮液 3 (NADH过氧化物酶)

0.02 mL

0.02 mL

混合*，约4分钟后读取溶液（A1）的吸光度，并添加以下物质开始反应：

悬浮液4（亚硫酸盐氧化酶）

0.02 mL

0.02 mL

混合*停止反应后（约30分钟）读取溶液（A2）的吸光度。如果反应在30分钟后仍未停止，则继续每隔10分钟读取吸光度，直到吸光

度稳定或持续下降超过10分钟**。

* 例如用塑料刮刀搅拌或用比色皿盖/封口胶密封后轻轻翻转比色皿

**如果样本的蠕变速率比空白管大，推断样本和空白的吸光度为加入悬浮液4(亚硫酸盐氧化酶)时的吸光度值。

注意:

由于亚硫酸盐溶液的特性不稳定，样品制备后应尽快进行分析。

5．结果计算 

分别对样品管和空白管两次测得的吸光度值进行相减(A2-A1)，然后从样品管的(A2-A1)中减去空白管的(A2-A1)，这样得到ΔA亚硫酸盐。按照常规，ΔA亚硫酸盐的数值至少要在0.100个吸光单位才能获得满意的试验结果。

SO2的含量可以依照下列公式计算：

c    =         V  ×  MW           x    ΔA 亚 硫 酸 盐          [g/L] ε × d ×