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南京蓝盾生物科技有限公司

Blue Shield Biotech

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CRISPR/Cas9定点插入细胞系的构建

根据给定GeneID或DNA序列,需要插入的DNA序列,以及插入位置。在插入位置位置附近设计3个sgRNA以及donor并构建载体、转染细胞、单克隆的分选。最终通过测序验证是否得到插入的细胞系。

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CRISPR/Cas9敲除细胞系构建

  根据给定GeneID或DNA序列,设计3个敲除位点构建敲除载体,通过测序验证载体是否构建成功。在构建成功的基础上,提取去内毒素质粒并转染细胞,进行敲除效率验证。

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Cas9慢病毒包装

构建慢病毒Cas9表达体系可以有效的将Cas9转入细胞,并高效表达。为第二步转入识别靶点的gRNA筛选阳性细胞的抗性基因或荧光基因,用于同源重组模板,降低了难度。

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RNAi慢病毒包装

慢病毒可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,适合RNAi研究和体内实验中难于转染的细胞。

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CRISPR/Cas9定点突变细胞系的构建

根据给定GeneID或序列以及点突变信息设计sgRNA和Donor、构建载体、转染细胞、单克隆分选、点突变细胞系建立。

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CRISPR/Cas9基因敲除载体构建

根据给定GeneID或DNA序列,设计3个敲除位点,合成正负Oligo DNA,构建敲除载体,通过测序验证载体是否构建成功。在构建成功的基础上,中量摇菌,提取去内毒素载体。

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稳定过表达蛋白的慢病毒包装

慢病毒是以HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的。将目标基因包装到用于过表达的慢病毒中,可以有效感染各种细胞,同时达到稳定遗传的效果。

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